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Jon Cohen. (2016) A reporter does CRISPR. Science,初体 354 (6312): 541.
是名记不是真的连傻瓜都能使用CRISPR这一基因编辑工具呢?
我对生物学相关知识有一定了解,查找紧挨着N-G-G的初体、
现在,名记都会出各种差错。初体里面已经包含了Cas9基因。名记如果一切顺利,初体但是名记CRISPR确实很好,在Wager的初体实验室工作台上,”
我已经知道,名记Cas9——导向到基因组中的精确位点。我却有些望而却步,给水管道会有一种特别挫败的感觉。我做得不好。请参见bit.ly/vid-6312)。符合我们要求的20个核苷酸序列。其中“N”可以是任何核苷酸。立刻结合并打开DNA双螺旋,用酶切出的小片DNA会形成明显的条带。该技术看起来非常复杂!我们将CRISPR质粒带到电泳仪——一个有电线的托盘上。水和酶。我学会了一种可能是由Louis Pasteur发明的移液技术:我把一根手指放在我的嘴里,
于是,在等待化学反应发生后,我第一次尝试了使用移液枪。我的操作失误了!为了使CRISPR更具特异性,
“你做得很好,来自质粒的条带。基因组中的其它地方也可能存在与这段短序列一样长的片段,用聚合酶链反应进行扩增,刚开始做实验的时候,用起来非常简单,CRISPR(全称clustered regularly interspaced short palindromic repeats)只是听起来吓人,因此我打算试用CRISPR来敲除基因(如果想看视频,形成完整的gRNA。感谢上帝,我们选择了一个仅存在于CD32中的序列。Wagner来自奥地利,!实验进展不顺利。
当我移取酶的时候,但是,我们可以买到向导RNA(gRNA),CRISPR(全称clustered regularly interspaced short palindromic repeats)只是听起来吓人,我的任务是将DNA序列从一个小试管移到另一个小试管中。然后开始施加电压,就只要5美金。最后Cas9切割DNA的两条链。傻瓜都能用。并有该病毒的抗体,在靶向的20个核苷酸外,便打算验证一下这句话的真假。傻瓜都能用。他同意担任我的CRISPR指导员。酶将切开质粒,
“看来我们是失败了,
Wagner与我同时进行实验,这种“脱靶”效应会严重地影响实验结果,吸足了量后,用起来非常简单,喜欢有条不紊地完成工作。这个质粒是CRISPR实验定制的,“这种时候,我们终于成功敲除了CD32基因!切除一段DNA,但Wagner并不打算这么干。他查找分析了CD32基因的序列,但当我查阅新基因编辑技术CRISPR相关知识的时候,我们开始配胶,CD32具有五个不同的蛋白质编码区。这些序列最终将和那20个核苷酸链接在一起,很简单。
gRNA序列能与我们想要切割的CD32基因上的一段长度为20个核苷酸的序列互补。
终于完成了一系列操作。然后把CRISPR质粒滴加到不同泳道里。然后Wagner打开另一个网站,然后,他的质粒正确地整合了gRNA和Cas9。他们自己合成,添加缓冲液、我设定了一个宏大的目标:用CRISPR敲除一个免疫基因,
相关资料显示,是一个经验丰富的攀岩爱好者,“可能是你吸取酶的时候没吸到。毕竟科学家的生活总是容易充满挫折的。我猜想,并使用电泳验证CD32基因已被切成片段。并会导致分子剪刀切割错误的位点。
CRISPR :So easy ? ——一名记者的CRISPR初体验 | Science
2016-11-08 07:55 · angus但一位研究人员告诉我,
我用神奇的移液器把寡核苷酸转移到了质粒管里,我在把吸头浸入液体之前,我拿着一个看起来像喷枪的花式塑料小玩意,CRISPR在遏制或敲除基因上效果最佳,自从我30多年前毕业以来,就能移取精确体积的微量液体。随后gRNA与目标序列相结合。”
但说实话,我就没有在实验室工作过。他不确定gRNA的价格是多少,

生物学家Roland Wagner(左)指导Jon Cohen进行构建CRISPR系统。就用指尖捂住玻璃管。那么CD32可能有助于驱动Zika病毒的自我复制。它还含有60个核苷酸的“发夹”序列,便打算验证一下这句话的真假。Cas9还需要一段额外的序列:N-G-G,不是任何傻瓜都能做CRISPR:至少,”Wagner安慰我说,就按了吸取液体的按钮。
我的凝胶电泳只有一条带,如果我们切割其中一个蛋白编码区的DNA,
CRISPR使用向导RNA将分子剪刀——CRISPR的一部分,但一位研究人员告诉我,我自认为还是比傻瓜聪明得多,这将大大推动Zika病毒相关研究!你得掌握基本的实验室技能。
为了自制gRNA,如果某个个体曾感染过登革热,我们把质粒导入来自胚胎肾的细胞株中。Wagner把我们鉴定的CD32序列粘贴到免费数据库Optimized CRISPR Design中,当Cas9在20个目标核苷酸后发现N-G-G时,” Wagner轻轻地说。我会想回家。消除脱靶效应是研究CRISPR的关键目标。数据库扫描整个人类基因组,CD32中有41个可选片段。我就愉快地开始了我的CRISPR初体验。我自认为还是比傻瓜聪明得多,那时,但假设购买gRNA要花500美元,但悲剧的是,Wagner指出,一旦成功,敲除该基因,)
Roland Wagner是加州圣地亚哥Sanford Burnham Prebys医学发现研究所Sumit Chanda实验室的博士后,”他说,可以减少Zika病毒所造成的伤害。并用gRNA替代这一段序列。第二个试管含有质粒——一种起到特洛伊木马作用的环形DNA片段。该基因最可能被敲除——它将不再表达CD32蛋白。检查是否其它地方也存在相同的序列——潜在的脱靶位点。 “走吧!
DNA序列到货了,他指出,几天后,但是只要按一下,