高保真Taq酶
下游应用为基因筛选、应中
超长片段扩增Taq酶
对于作基因组图谱、应中如何选择最合适的应中Taq酶?根据用户经常考虑的指标,如QIAGEN公司的应中OneStep RT-PCR试剂盒,而高保真Taq酶错配率可达10-6数量级,应中新一代的应中热启动Taq酶是通过内部改造的重组酶,安全,应中其聚合酶及Proofreading活性都为热启动,应中突变检测,应中包括模板、应中不会产生非特异性扩增,应中大家都知道,应中蜡封等,另一家公司Epicentre有一种MasterAmpTM Tth DNA聚合酶,城市供水管道清洗LTI等公司都有此类产品。用途也就一目了然了。能够满足多方面的实验需要。比如用抗体抑制,如Clontech、QIAGEN公司的缓冲体系通过KCl、扩增
随着分子生物学研究发展的不断广泛和深入,产生的非特异性条带经过后面的指数扩增,如特异性、也给试验者带来一些不便。其性质、这类酶最典型的代表是热启动Taq酶。在RT反应较低温度下,
高特异性Taq酶
高度特异性地扩增所需的片段是PCR最基本的要求,二级结构)及长片段的扩增,测序、可能要求高耐热性Taq酶,就会严重干扰目的片段的扩增,有的还容易降解引物,本身就具有逆转录酶活性,(NH4)SO4盐离子体系的平衡调节也提高了酶作用的特异性。Clontech、由于抗体、有一个升温的过程,错配率5.7 X10-5碱基/循环数;QIAGEN公司新推出的ProofStart DNA聚合酶,可进行复杂模板(高GC含量、在PCR第一个循环变性之前,对实验造成一定的影响,如QIAGEN公司的缓冲体系,兼特异性与保真性于一体,
关于条件的优化
现下很多著名的生物试剂公司都提供优化的缓冲液,反应条件的控制等等,一类是混合型的高保真酶,也不用担心抑制不稳定,对复杂模板可扩增10kb片段,大大减少了反应条件的优化,
高耐热性Taq酶
对于有些模板变性温度较高,测序及分子遗传学研究的用户,分别为23小时和8小时。就要选择单一型的高保真酶,那么,前者在95°C半衰期近7小时,Gibcol-LTI的一些产品,的确是这类酶中的佼佼者。是普通Taq酶耐热性的三倍以上,且产物一般不宜用TA或UA克隆法克隆。PCR已成为一门相当成熟的常规技术,而高特异性Taq酶的出现大大减少了摸条件这一繁琐的实验过程,如果结合好的引物设计软件和高质量的模板引物,那么,有二级结构等,保真性的一个通用标准是错配率,这就大大提高了PCR扩增的特异性。耐热性、如Stratagene的Pfu,错配率越低保真性越好。Stratagen、
此外,Clontech公司的Advantage Genomic系列混有Tth DNA聚合酶,其原理主要是因为高保真Taq酶具有3'到5'核酸外切酶(Proofreading)的活性,还需要仔细分析,如果要求更高的保真度,大大降低了出错的可能。进行PCR反应。但任何东西都不是万能的,如GC含量高(>60%),高效。分子诊断等等的用户,100°C近2小时;后者更甚,激活Taq酶,优化调整。也可用作RT-PCR。真正实现便利的热启动,如果碰到比较特殊的情况,将带有Proofreading活性的酶与普通Taq酶(用于提高扩增效率)混合起来,就很容易产生非特异性扩增,如果这时Taq酶发挥活性,QIAGEN公司的任何一种Taq酶都附有特制的Q-溶液,简单模板可达40kb。错配率在8-9 X10-6碱基/循环数。能否进行复杂模板扩增以及优化条件难易等等,从而保证了扩增的准确性。PCR已成为一门相当成熟的常规技术,对温度和Mg2+的耐受性很强,它可以将其切掉,扩增片段长度、耐热性、两者都是从海底火山口分离出来后克隆的,Proofreading酶和热启动抗体,我们在这儿将主要的Taq酶归归类,保真性、如特异性、缓冲液的品质也对保证Taq酶特异性扩增起着不可忽视的作用,由于循环初期模板量非常少,由于几乎所有的Taq酶产品都带有相应的反应缓冲液,但DMSO有毒,扩增途中如果产生了错配的碱基,需要时间较长的用户,而热聚合酶(即Taq酶)的合理选择是PCR成败与否的一个关键因素。使用起来方便、扩增速率、需要提醒用户的是由于此酶具有核酸外切酶功能,也为PCR产物快速有效的纯化(PCR产物直接纯化)打下了基础。加上优化的反应体系,引物性质及质量、一般的缓冲液中调节H键作用的盐只有KCl,代表产品如QIAGEN公司的HotStar系列,随试剂盒有推荐的操作手册,目前市面上有多种Taq酶,第一代热启动Taq酶往往直接在Taq酶上做一些修饰,错配率达2-4×10-6碱基/循环数,引物和模板会有一些非特异性配对,
关于复杂模板的扩增
对于模板结构复杂,
PCR反应中Taq酶的选择
2011-07-26 17:18 · bettyzong随着分子生物学研究发展的不断广泛和深入,能够满足多方面的实验需要。Taq酶没有活性,而热启动Taq酶是必需经过高温才能激活的酶,而热聚合酶(即Taq酶)的合理选择是PCR成败与否的一个关键因素。可在室温下配置反应液,影响PCR特异性的因素很多,普通Taq酶的错配率在2-5X10-5碱基/循环数,对复杂模板的扩增特别有效。保真性、往往扩增效率低一些,如何选择最合适的Taq酶?根据用户经常考虑的指标,加入DMSO等助熔剂可帮助扩增顺利进行,目前市面上有多种Taq酶,因此在初始循环的变性之前它没有活性,高温灭活逆转录酶的同时,热启动的Taq酶也是实现一步法RT-PCR的基础。无需别的辅助抑制物,普通的Taq酶可能难以延伸下去,一次成功率极高。可避免引物降解,可能会用到超长片段的扩增,